Виварий является важной частью научно-исследовательских институтов, лабораторий и других учреждений, где проводят исследования на животных. Для вивария совершенно не пригодны подвальные или неприспособленные помещения (сараи, пристройки и т. д.) с большой влажностью и сквозняками. Здание вивария, как и питомника для разведения животных, следует строить на возвышенном и сухом месте, с прилегающим к нему земельным участком. В виварии должно быть достаточно солнечного света, участок, прилегающий к помещениям, защищают от ветра. Территорию вивария обносят глухим забором; в непосредственной близости к основному помещению устраивают вольеры.

Здание вивария состоит из основных помещений, в которых содержат лабораторных животных, и подсобных. В каждой комнате вивария должны находиться животные одного вида. Как правило, крупных лабораторных животных (обезьяны, собаки) содержат в различных комнатах, также отдельно содержат кошек. Мелких животных (морские свинки, крысы, мыши) размещают обычно в одном помещении. Собак и кроликов можно содержать вне помещения, в клетках под навесом или в вольерах.

Важной и необходимой частью вивария являются подсобные помещения: кухня, комната для персонала, карантин, изолятор, мойка. Кухню для приготовления кормов оборудуют плитой и холодильником с подводкой горячей и холодной воды. Кухню размещают в одном здании вивария рядом с кладовыми для корма. Комнату обслуживающего персонала оборудуют индивидуальными шкафчиками для хранения спецодежды и спецобуви. К ней должна прилегать душевая установка для персонала вивария. Всех поступающих в виварий животных переводят в основное отделение только после пребывания в карантине. Помещение карантина должно быть изолировано и иметь все необходимое для ухода за животными. Наряду с этим необходимо иметь изолятор для заболевших или подозрительных по заболеванию лабораторных животных, а также помещение для вскрытия трупов. Предусматривается помещение для мойки, дезинфекции и сушки клеток и другого инвентаря вивария, а также спецодежды сотрудников. В виварии должна находиться печь для сжигания трупов и ванна для купания животных.

Необходимой частью вивария является клиника для животных. В клинику помещают после операций обычно собак; они находятся в ней до тех пор, пока не выйдут из тяжелого состояния после выполненного вмешательства. Клинику оборудуют специальными клетками или клетками обычного типа; в ней должны быть горячая и холодная вода, газ, аптечка с необходимыми лекарственными препаратами для выхаживания животных. В зависимости от характера проводимых исследований клинику оборудуют специальными станками для фиксации животных.

Полы вивария, особенно основного отделения, должны быть водонепроницаемыми и иметь уклон к стокам канализации. Полы покрывают пластиком, метлахской плиткой, бетонируют или в крайнем случае асфальтируют. Стены на высоту 2 м от пола покрывают глазурованной плиткой, пластиком или окрашивают масляной краской. Система канализации должна иметь широкие стоки, позволяющие избежать засорения, покрытые металлической решеткой. Сточные воды перед их поступлением в общую канализацию необходимо обезвреживать.

В помещениях вивария, помимо естественной вентиляции (форточки, фрамуги, открывающиеся окна), устраивают приточно-вытяжную вентиляцию с многократным обменом воздуха. Отопление вивария должно быть центральным, необходимо предупреждать появление сырости и поддерживать температуру в пределах 12-18°.

В зависимости от профиля научно-исследовательского учреждения (экспериментальная хирургия, нормальная и патологическая физиология, микробиология, токсикология и т. д.) при планировке вивария следует предусмотреть необходимые специальные дополнительные помещения. В ряде случаев выделяют изолированные помещения для содержания лабораторных животных, зараженных культурами возбудителей особо опасных инфекций и радиоактивными веществами, с операционной при каждом из этих помещений. Каждое помещение должно иметь холодильник и необходимое оборудование для заражения животных и вскрытия трупов.

Руководить виварием должен специалист-зоотехник, прошедший подготовку в области лабораторного животноводства.

Собаки . При клеточном содержании собак в основном отделении вивария не должно быть скученности, так как при этом создаются неблагоприятные санитарно-эпидемиологические условия с опасностью быстрого распространения инфекции на большую группу животных. Собак лучше помещать в отдельные небольшие комнаты с устройством в каждой из них 5-6 клеток.

При необходимости сбора мочи собак помещают в так называемые обменные клетки, пол которых устроен из сетки и подвижного лотка со стоком.

Собаки с беззвучным лаем. Поскольку содержание большого количества собак связано с определенными трудностями из-за шума, который создают лающие животные, в ряде случаев прибегают к перевязке возвратных нервов на шее с обеих сторон, в результате чего денервируются голосовые связки и собаки теряют способность лаять.

Техника операции. Оперируют животных под морфинным обезболиванием с добавлением местной анестезии (0,5 или 0,25% раствором новокаина) или под эфирным наркозом. Разрез кожи длиной 8-10 см проводят по срединной линии шеи от нижнего края щитовидного хряща вниз. Рассекают фасцию вместе с кожной мышцей шеи. Тупо разъединяют обе грудино-подъязычные мышцы, левую мышцу отодвигают кнаружи (рис. 1). В клетчатку между левой грудино-подъязычной мышцей и трахеей вводят раствор новокаина. Возвратная ветвь блуждающего нерва проходит в узкой щели между трахеей и пищеводом и прилегает к задне-боковой поверхности трахеи. Нерв обнаруживают в клетчатке на уровне 6-10-го кольца трахеи, выводят в рану тупым крючком и пересекают или резецируют на протяжении 1 см. Крючки извлекают и левую грудино-подъязычную мышцу укладывают на место. Таким же путем пересекают возвратную ветвь блуждающего нерва справа. Необходимо учитывать, что на уровне верхних колец трахеи возвратная ветвь блуждающего нерва делится на конечные ветви и принимает рассыпной тип. Пересечь при операции все мелкие нервные веточки не удается, и операция может не дать желаемого результата.

У собак после перерезки возвратных нервов наблюдаются явления дыхательной недостаточности, что делает их не пригодными для сложных экспериментальных операций (Л. М. Нагибин и др., 1967; Н. А. Супер и др., 1967).

Кошки . Содержать кошек в виварии трудно, поскольку они не переносят клеток. Для кошек отводят специальную комнату, где они имеют свободу перемещения. В этих условиях они могут жить в виварии длительное время. Комната должна быть светлой, теплой, хорошо вентилируемой, с полками для сидения кошек. На полу комнаты устраивают отхожее место, представляющее собой ящик, заполненный сухим песком, торфом, опилками. Ящик следует часто очищать, запах в комнате может быть устранен перманганатом калия.

Кролики и мелкие лабораторные животные . Животных содержат в клетках, размещенных на стеллажах, смонтированных в виде батарей, или комплектах клеток, расположенных на колесах. Клетки устанавливают на стеллажах на расстоянии 30-50 см от стен, нижний ряд клеток должен располагаться в 50- 70 см от пола. Между стеллажами оставляют проход не менее 1 м. Этажи клеток на стеллажах или батареях изолируют друг от друга водонепроницаемым материалом, исключающим попадание экскрементов на расположенные ниже клетки.

В зависимости от вида животного рекомендуются следующие размеры клеток (В. Н. Иванов, 1967): для мышей (10-20 животных) -200X300Х150 мм, для крыс (10- 15 животных) - 334X450X200 мм, для морских свинок (5-10 животных) - 486X450X200 мм, для кроликов (1-2 в зависимости от возраста и породы)-486X450X300 мм.

Клетки делают из различных материалов: жести, проволоки, стали,
фанеры, пластика и т. д. Они должны быть прочными и экономичными, легко очищаться, быть стойкими к дезинфицирующим веществам и термической обработке. Клетки из нержавеющей стали наиболее приемлемы для работы с радиоактивными изотопами.

Рис. 1. Операция выделения и пересечения ветвей возвратных нервов для создания беззвучного лая у собак.
1-левая доля щитовидной железы; 2 - возрастная ветвь блуждающего нерва; 3 - левая грудино-подъязычная мышца (оттянута крючком); 4 - пищевод; 5-трахея.

Комната, где располагаются клетки с животными, должна хорошо вентилироваться, относительная влажность воздуха должна быть в пределах 40-45%. Даже при наличии приточно-вытяжной вентиляции с целью снижения содержания в воздухе аммиака и продуктов жизнедеятельности животных рекомендуется применять торфяные подстилки или опилки с добавлением суперфосфата. Процесс уборки клеток может быть автоматизирован; уборка осуществляется 1-2 раза в сутки.

На передней стенке клетки устанавливают кормушку, автопоилку и вешают табличку, на которую заносят основные данные о животном, виде оперативного вмешательства и т. д.

Кроликов и морских свинок нередко содержат вне помещений вивария. Для этого используют клетки, располагая их в несколько ярусов, под общей крышей. Наружное содержание способствует выращиванию здоровых, более стойких к различным заболеваниям кроликов и большей частью распространено в питомниках.

Большинство видов лабораторных животных адаптируются на­столько хорошо, что живут и размножаются в самых неблагопри­ятных условиях. Мыши, например, могут переносить все - от тро­пических условий до температуры ниже нуля. Они размножаются даже в холодильниках, в которых хранят запасы замороженного мя­са. Но при какой-то температуре в пределах этого диапазона мыши чувствуют себя лучше всего, именно при этой температуре с не­большими колебаниями в обе стороны их следует содержать.

Свобода передвижения животных в помещении ограничена. Они проводят жизнь в клетках, т.е. в условиях микроклимата внутри клетки. Следовательно, в основу проектирования помещения для животных необходимо положить принцип создания таких ок­ружающих условий, которые обеспечивали бы необходимый мик­роклимат для животных и такие размеры и формы комнат, которые были бы удобны для обслуживающего персонала.

В вивариях и питомниках должны быть так же служебные по­мещения, необходимые в работе по уходу за животными. Практика показывает, что примерно половина общей площади помещения может быть отведена для размещения животных, а другая половина -под комнату для ведения всевозможных записей и т.д.

В небольших вивариях или питомниках указанные соотношения смещаются в сторону преобладания подсобных помещений. К со­кращению полезной площади приводит, также, необходимость соз­дания в них максимальных гигиенических условий, связанных с изо­ляцией животных, стерилизацией поступающих извне материалов и т.д.

Виварий (лат. Vivarium- заповедник для дичи, зверинец) - по­мещение для содержания и разведения лабораторных животных, ис­пользуемых для научных целей и в практике органов ветеринарии и здравоохранения. Виварии бывают весьма различные как по виду, так и по количеству находящихся в них животных, что определяется особенностями научных исследований. Виварии могут быть исполь­зованы не только для содержания, но и для увеличения поголовья лабораторных животных.

Разведение животных в вивариях практикуется обычно в тех случаях, когда для эксперимента необходимо иметь животных оп­ределенного вида, величины, массы, пола и возраста или выращен­ных в специальных условиях кормления, освещения и т.д. Кроме то­го, наличие в вивариях собственного питомника значительно об­легчит проблему бесперебойного снабжения лаборатории необхо­димым количеством мелких животных. В них могут проводиться не­которые научные исследования, например, по выяснению результа­тов длительного влияния различных пищевых рационов и др.

В лабораторной практике разделяют два понятия: виварий - по­мещение для содержания в надлежащих условиях животных, на­ходящиеся в состоянии опыта, и питомник - помещение для раз­множения и содержания животных до использования их. Беспере­бойное снабжение лаборатории животными возможно только при организации крупных питомников, руководимых квалифицирован­ными специалистами и находящихся под жестким ветеринарно-са-нитарным контролем.

Устройство виварий определяется в первую очередь видовым составом животных, в связи с чем различают виварии специализи­рованные (псарни, обезьянники и т.д.) и общего или комплексного типа, обеспечивающие содержание различных животных - собак, кошек, кроликов, морских свинок, белых крыс, мышей. Виварий

также могут включать аквариумы для пресноводных и морских жи­вотных, террариумы для амфибий и рептилий, вольеры и клетки для птиц и другие приспособленные помещения для разных видов мле­копитающих.

Различают помещения зимние и летние, постоянные и вре­менные (так называемые выгулы). В каждом виварий обязательно должно быть карантинное помещение для вновь поступивших и изо­лятор для заболевших животных (при работе с искусственно за­раженными животными всегда предусматривается постройка спе­циально устроенных изоляторов). Для ухода за животными после сложных операций в современных вивариях устраивают, так назы­ваемые клиники, где животным создают особенно благоприятные ус­ловия и где они находятся под постоянным наблюдением.

Клинические помещения могут также использоваться для дли­тельного содержания животных, требующих специального ухода. В случае необходимости при устройстве клиник предусматриваются как общие, так и одиночные палаты. Обязательно должны быть спе­циально оборудованные помещения, позволяющие проводить сан­обработку, как вновь поступивших животных, так и назначенных на операцию или используемых в длительных экспериментах, требую­щих соблюдения определенных санитарно-гигиенических условий (условно-рефлекторные опыты и др.).

В ряде случаев совершенно необходимо иметь в виварии спе­циально оборудованную дезинфекционную камеру, позволяющую быстро обрабатывать зараженные клетки, спецодежду сотрудников и подсобный инвентарь. Должно быть предусмотрено помещение для вскрытия павших животных и хранения трупов. Виварий обо­рудуются кухней с раздаточной, мойкой и складскими помещениями для хранения продуктов и запасного инвентаря (рис.87).

Необходимо уделять большое внимание вентиляции виварий. Обычные методы вентиляции простым отсасыванием воздуха из по­мещения для животных, как правило, оказываются недостаточными. Для удаления газообразных продуктов распада выделений живот­ных, устраивают приточно-вытяжную вентиляцию. Помещения ви­варий должны иметь водоустойчивый, например, каменный или це­ментный пол со сточными канавами и надежными трапами, что по-

(волит быстро производить уборку струей воды из гибкого шланга, подключенного к водопроводу. Чтобы можно было обмывать и де­зинфицировать стены, их облицовывают кафельной плиткой.

Следует отдать предпочтение относительно небольшим по­мещениям для животных. В них меньше шума, который беспокоит животных, их легче вентилировать и поддерживать в них чистоту, наконец, они представляют меньшую опасность в инфекционном отношении. По форме помещения для животных должны быть ско­рее удлиненными, а не квадратными, чем достигается более эко­номное использование пространства (рис.87).

Впрочем, в некоторых случаях более удобны квадратные поме­щения, при этом в центре комнаты остается достаточно места для работы. Так, например, в комнате размером 2,5x5,0 м с одной или двумя дверями, стеллажи с клетками удобно разместить вдоль длин­ных стен. Возможно также размещение стеллажей в центре комнаты с доступом к ним с двух сторон, однако, такое расположение стел­лажей менее экономично.

^ 0

Рис. 87. План вивария для лабораторных животных. Чистые служебные помещения: I - прихожая, туалет, душевые; 2 - контора; 3- кормокухня с недельным запасом кормов; 4 - стерилизационная; 5 - склад подстилочных материалов; 6 - склад клеток; 7- чистый коридор. Помещения для животных: 8 - подопытные животные; 9 - разведения животных: а - стел­лажи. Грязные служебные помещения: 10 - грязный коридор; 11-моечная; 12 - трупо- и мусоросжигалка.

Практика показывает, что в виварий должно быть четыре изол рованные секций. Первая секция предназначается для животны еще не взятых в опыты. Это секция для размножения животных возможно, для поступающих из вне (карантин), ее удобно называ секцией здоровых животных. Вторая - предназначается для по опытных животных. Сюда поступают животные из первой секции остаются здесь на все время опыта. Они не должны возвращаться в секцию здоровых животных. Эту секцию можно назвать секцией подопытных животных. В третьей секции хранятся корма, чистая подстилка, чистые и запасные клетки и другой инвентарь. Четвер­тая - предназначается для чистки клеток, грязной подстилки, тру­пов павших животных и т.д. Чистые клетки и другие предметы обо­рудования возвращаются на склад, откуда их доставляют для ис­пользования в ту или другую секцию для животных.

Большое внимание следует удалять сообщению-связи между на­званными секциями. В идеальном случае чистый и грязный пути циркуляции животных, кормов и инвентаря нигде не должны пере­секаться. В помещении для животных целесообразно устраивать две двери, одну из них для доставки чистых клеток, кормов и т.д., дру­гую для удаления грязных клеток. Таким образом, поток кормов и инвентаря все время идет в одном направлении от чистого к гряз­ному. Клетки и другие предметы оборудования после использования и чистки возвращаются в чистые секции лишь после стерилизации. Если устройство отдельных чистых и грязных переходов оказывает­ся невозможным, тогда одним и тем же переходом можно пользо­ваться с разной целью в разное время дня. Например, для движения грязных материалов - по утрам, а для чистых - во второй половине дня, после тщательного мытья и дезинфекции.

Наиболее удобная для работы удлиненная форма комнат для животных с пристеночным (а) и центральным (б) размещением стел­лажей (В) для клеток и водопроводной раковины (Г). Пристеночное размещение стеллажей, помимо удобства для работы, экономичнее центрального (рис.88).

Рис. 88. Схема размещения стеллажей в комнатах: а-пристеночное; б-центральное; В-клетки; Г-водопроводная раковина.

До сих пор обсуждение касалось помещений для животных в самой общей форме, без относительно того, предназначаются ли они для мышей, морских свинок, крыс или других животных. За немно­гими исключениями, все такие помещения должны быть пригодны для всех видов лабораторных животных. Дорогостоящий и благоус­троенный питомник или виварий не строится на 1-2 года, а виды жи­вотных, которые в нем содержатся, в разные годы могут быть раз­ными. В помещении, которое в этом году используется для мышей, в будущем году могут находиться кролики, и такая перемена должна происходить без серьезной перепланировки.

4.3. Полученные из специализированного питомника (расположенного в том же городе, районе) животные размещаются сроком на три дня для адаптации к новым условиям. Последующие сроки изоляции или карантина для этих животных, а также для животных, полученных из питомника в других городах, определяются в зависимости от условий содержания животных, характера предстоящих экспериментов, расстояния и условий перевозки и др.

4.4. Для животных, полученных не из специализированных питомников, устанавливается следующий срок их карантирования:

Для мышей и крыс - 14 дней;

Для морских свинок и кроликов - 21 день;

Для собак и кошек - 30 дней;

Для остальных животных и птиц - 21 день.

В отдельных случаях для использования в экспериментах беременных свинок, новорожденных и молодых животных, а также в краткосрочных опытах срок карантирования может быть сокращен при условии размещения этих животных в изолированных помещениях и соответствующего наблюдения.

4.5. В период карантина за животными ведется ежедневное клиническое наблюдение, термометрия и регистрация общего состояния животных в специальном журнале по форме согласно Приложению N 5.

4.6. В карантинных и экспериментальных секциях животные помещаются в чистые, заранее продезинфицированные (проавтоклавированные) клетки.

4.7. Уход за животными, находящимися в карантине, осуществляется персоналом, закрепленным за данными помещениями.

4.8. Запрещается выносить из карантинных помещений в другие помещения и секции для экспериментальных животных корм, спецодежду и инвентарь.

4.9. В течение периода карантина производится периодическая смена клеток (ванночек). По окончании карантина освободившиеся клетки и инвентарь передаются в дезинфекционно-моечное отделение.

Чистка и мойка клеток и др. инвентаря из карантинных секций может производиться в общем дезинфекционно-моечном отделении вивария только после предварительного обеззараживания. Отходы также должны обеззараживаться, сжигаться. Методы дезинфекции, дезинсекции, режим автоклавирования устанавливаются в каждом конкретном случае в зависимости от специфики работы учреждения.

4.10. В период адаптации или карантина животное с подозрением на инфекционные заболевания подвергаются бактериологическому исследованию. При подтверждении инфекционного заболевания мыши, крысы, хомяки, морские свинки и кролики всей поступившей партией уничтожаются, а в отношении собак, кошек и др. домашних животных сроки карантина продлеваются в зависимости от установленного заболевания.

4.11. Помещения карантина после каждой партии переданных на эксперимент животных и после каждого случая выявления инфекционных заболеваний подвергаются тщательной дезинфекции.

4.12. В случае возникновения массовых заболеваний среди животных, находившихся в карантине, или при обнаружении в период экспериментов отдельных случаев инфекционных заболеваний, особо опасных для лабораторных животных и человека, в виварии проводится необходимый комплекс профилактических мероприятий. В этом случае проведение опытов на животных временно прекращается.

4.13. По истечении срока карантина животные передаются в экспериментальные секции.

V. Режим работы и основные правила содержания

лабораторных животных

5.1. В каждом отдельном помещении рекомендуется содержать животных только одного вида. Если по условиям эксперимента необходимо совместное содержание лабораторных животных разных видов в одной секции, то следует размещать их на разных стеллажах.

5.2. На каждой клетке (боксе, вольере и т.д.) должна быть этикетка с указанием данных о животном и сроках эксперимента (образец этикетки указан в Приложении N 6).

5.3. Лабораторные животные и птицы содержатся в клетках со сплошным дном на подстилке или в клетках с сетчатым дном - полом. В качестве подстилки применяются древесные опилки, стружка или подстилочный торф. Подстилка заранее автоклавируется или выдерживается в сухожаровом шкафу (при Т 150 - 180 град. C 15 - 20 минут). Толщина слоя подстилки в клетке - 5 - 10 мм. При содержании животных в клетках с сетчатым дном подстилка посыпается в поддон (противень).

5.4. Вся работа по уходу и содержанию лабораторных животных строится в соответствии с распорядком дня и регламентом работ, утвержденными руководителем данного учреждения. В распорядке дня предусматривается время на санитарную обработку помещения и оборудования, раздачу кормов и проведение экспериментальных работ и манипуляций.

5.5. Кормление лабораторных животных осуществляется в соответствии с нормами, утвержденными Приказом Министра здравоохранения СССР от 10 марта 1966 г. N 163.

5.6. Корма и полуфабрикаты хранятся в специально отведенном для этой цели помещении (складе). Выдача кормов производится в установленном порядке.

В кормокухне вивария допускается хранение не более чем 2 - 3-дневного запаса кормов. При кормлении животных гранулированными кормами и при наличии в клетках бункерных кормушек разрешается авансовое получение кормов со складов на 7 - 10 дней.

5.7. Для хранения запаса кормов на кормокухне и в кладовой вивария оборудуются специальные лари (металлические или обитые изнутри жестью). Скоропортящиеся продукты хранятся в холодильнике. Доставка кормов со складов производится специально выделенным персоналом (рабочими, не занятыми непосредственно уходом за животными).

5.8. Распределение кормов по комнатам-секциям производится специально выделенным для этих целей рабочим или персоналом кухни в продезинфицированной посуде (таре), закрепленной за каждой секцией. Списание кормов производится в установленном порядке согласно фактическому наличию животных на каждый день с представлением в бухгалтерию учреждения актов от лабораторий на вышедших из опыта или вынужденно убитых животных.

5.9. Вход в кормокухню персонала, осуществляющего уход за лабораторными животными, и посторонних лиц запрещается.

5.10. Снабжение лабораторных животных питьевой водой производится из водопровода, качество воды должно соответствовать ГОСТу "Вода питьевая".

5.11. Проращивание зерна на зеленую массу для подкормки лабораторных животных производится в специально отведенных для этой цели помещениях. Допускается скармливание животным корневой массы растений при отсутствии в ней плесени.

5.12. Раздача кормов и поение животных должны осуществляться только после окончания уборки помещения, чистки или смены клеток и выноса из секций грязного оборудования, поддонов с подстилкой и др. материалов, подлежащих дезинфекции или утилизации.

5.13. Чистка клеток и уборка комнат производится с помощью инвентаря, строго закрепленного за каждой комнатой.

5.14. При периодической смене клеток животные 1 - 2 раза в неделю пересаживаются в заранее продезинфицированные клетки с подготовленной кормушкой, поилками и подстилкой. Грязные клетки вместе с подстилками, кормушками и поилками передаются в дезинфекционно-моечное отделение для их последующей обработки.

5.15. Чистка клеток осуществляется ежедневно. При этом загрязненная подстилка и прочие отходы из клеток собираются в специальные металлические бачки с крышками. Бачки с крышками плотно закрываются и передаются в дезинфекционно-моечное отделение.

5.16. При использовании клеток с сетчатым дном и изолированными от клеток поддонами последние периодически (не реже одного раза в неделю) заменяются новыми. Грязные поддоны с подстилками передаются в дезинфекционно-моечное отделение для их последующей обработки.

5.17. При обслуживании одним рабочим нескольких видов лабораторных животных вначале обрабатываются клетки с морскими свинками, затем клетки с мышами, крысами и кроликами. В последнюю очередь обрабатываются помещения, где содержатся собаки и кошки.

5.18. Мыть и дезинфицировать клетки, кормушки, поилки непосредственно в секциях запрещается.

5.19. Перед окончанием рабочего дня в секциях производится влажная уборка с использованием 1% раствора хлорамина или др. дезинфицирующего вещества. Не реже одного раза в месяц производится санитарный день, в течение которого производится уборка всех помещений. Порядок проведения санитарного дня определяется заведующим клиникой (виварием).

5.20. Дезинфекция, чистка и мойка клеток, кормушек, поилок и др. инвентаря производится рабочими, специально закрепленными за дезинфекционно-моечным отделением. Контроль за эффективностью чистки и обеззараживания инвентаря возлагается на ветеринарного врача вивария.

5.21. Условия сбора, хранения, вывоза (или утилизации) отходов (подстилки, навоза, остатков кормов и т.д.) должны быть определены в каждом конкретном случае по согласованию с местными органами и учреждениями санитарно-эпидемиологической службы. При работе с инфицированным материалом необходимо производить обезвреживание отходов с помощью автоклавирования или обработки дезинфицирующими растворами.

5.22. В секциях с лабораторными животными необходимо установить постоянный контроль за температурно-влажностным режимом. Для контроля качества воздушной среды в помещениях, где содержатся животные, рекомендуется периодически (2 - 3 раза в месяц) определять концентрацию вредных газов (углекислого и аммиака).

5.23. Передача животных на опыты производится по разовым требованиям согласно годовой заявке от лабораторий, утвержденной руководителем учреждения. Работа с животными разрешается только в часы, предусмотренные распорядком дня вивария.

5.24. При обнаружении в секциях больных животных последние с ведома экспериментатора уничтожаются или переводятся в изолятор. Вопрос о дальнейшем использовании заболевших животных решается в течение не более 2-х суток.

5.25. Трупы животных до патологоанатомического вскрытия хранятся в специальном холодильнике диагностического кабинета не более одних суток, после чего подлежат утилизации. Хранение трупов животных в клетках и на полу в экспериментальных секциях категорически запрещается.

5.26. Патологоанатомическое вскрытие животных производится экспериментатором. В случае гибели животного вне зависимости от эксперимента на вскрытии присутствует представитель клиники (вивария).

5.27. Каждый случай падежа или вынужденного убоя животного должен быть зафиксирован в специальном журнале по форме согласно Приложению N 7.

5.28. Запрещено посещение клиники (вивария) посторонними лицами без специального разрешения. Сотрудники учреждения, выполняющие работу в клинике (виварии), обязаны:

А) соблюдать установленные правила распорядка дня и режим работы;

Б) вести систематическое наблюдение за своими экспериментальными животными;

В) вести первичную документацию, своевременно заполняя этикетки на клетках с экспериментальными животными;

Г) посещать только те помещения вивария, в которых находятся животные, закрепленные за данным сотрудником;

Д) по окончании экспериментов или любой др. текущей работы с лабораторными животными оставлять рабочее место в надлежащем порядке;

Е) следить за своевременным списанием вышедших из опыта или вынужденно убитых экспериментальных животных;

Ж) сообщать специалистам клиники (вивария) о всех замеченных случаях заболеваний среди экспериментальных животных, а также своевременно уведомлять специалистов вивария о предполагаемых патологических состояниях животных в соответствии с условиями эксперимента.

5.29. Сотрудникам учреждения, выполняющим работу в виварии с экспериментальными животными, запрещается давать какие-либо указания рабочим по изменению режима содержания и кормления животных без согласования со специалистами вивария.

5.30. При проведении совместных исследований на животных в других учреждениях сотрудникам лабораторий запрещается на это время работа в клинике (виварии) своего института (учреждения).

5.31. Все действия, которые могут причинить лабораторным животным боль (операции, тотальное обескровливание, вживание датчиков и пр., а также вынужденный убой животных), должны производиться с использованием наркотизирующих средств. Если по условиям эксперимента противопоказано применение анестезии, то все вышеуказанные действия необходимо проводить в максимально короткий срок, руководствуясь Правилами гуманного обращения с лабораторными животными (Приложение N 8).

VI. Правила личной гигиены

6.1. Весь персонал вивария должен быть обеспечен спецодеждой, спецобувью, мылом и полотенцами в соответствии с действующими правилами и нормативами.

6.2. В комнатах с животными, кормокухне, дезинфекционно-моечном отделении, операционной и диагностическом кабинете необходимо иметь дезинфицирующие растворы для обеззараживания рук.

6.3. Персонал вивария обязан:

А) приходя на работу снимать верхнюю одежду и обувь и надевать спецодежду, спецобувь;

Б) по окончании работы (желательно и до начала работы) пройти обработку в санитарном блоке (принять душ или ванну);

В) вешать домашнюю одежду и спецодежду обязательно в разных отделениях индивидуального шкафа;

Г) периодически (но не реже одного раза в месяц) дезинфицировать свои индивидуальные шкафы;

Д) по окончании каждого отдельного этапа работы в соответствии с распорядком дня, а также перед приемом пищи обязательно мыть и дезинфицировать руки.

6.4. Во всех производственных помещениях клиники (вивария) категорически запрещается принимать пищу и курить.

6.5. Все принимаемые на работу с лабораторными животными лица должны пройти медицинское обследование, включающее исследование на бациллоносительство возбудителей туберкулеза и всей группы кишечных инфекций. Последующие обследования проводятся не реже одного раза в год. Больные туберкулезом, венерическими заболеваниями, кожными и др. заразными заболеваниями к работе в виварии не допускаются.

6.6. При проведении на животных экспериментов с инфекционными возбудителями, опасными для людей, обслуживающий персонал вивария подвергается профилактической иммунизации.

6.7. Для всех вновь принимаемых на работу в виварий сотрудников проводится инструктаж по вопросам охраны труда и техники безопасности, правилам внутреннего распорядка в зависимости от выполняемой работы. Ответственность за проведение инструктажа возлагается на заведующего виварием. Допуск к работе без инструктажа запрещается. В дальнейшем не реже одного раза в год проводится повторный инструктаж. Результаты проведения инструктажа регистрируются в специальном журнале по форме, установленной приложением N 5 к Приказу Министра здравоохранения СССР от 20 июня 1968 г. N 494.

Тема 4. Использование лабораторных животных в диагностических исследованиях. Цели использования лабораторных животных в вирусологии

Задание к следующему занятию

Подведение итогов занятия

Задания

1. Найти под световым микроскопом в препаратах и зарисовать:

а) цитоплазматические тельца-включения;

б) внутриядерные тельца-включения;

в) вирионы вируса оспы в окраске по Морозову.

2. Ознакомиться с устройством и принципом работы электронного микроскопа.

3. Дешифрировать электронные микрофотографии вирионов разных вирусов (дать их схематический рисунок).

Самостоятельная работа студентов

Студенты знакомятся с устройством светового, люминесцентного и электронного микроскопов (в лаборатории), зарисовывают схему строения электронного микроскопа. Знакомятся с подготовкой препаратов для электронной микроскопии. Просматривают готовый препарат в люминесцентном микроскопе. Зарисовывают схему прямого и непрямого метода РИФ.

Контрольные вопросы:

1. Устройство электронного микроскопа.

2. Методы подготовки препаратов для просмотра в электронном микроскопе.

3. Люминесцентную микроскопию (РИФ) прямой и непрямой методы.

4. Значение электронной и люминесцентной микроскопии в вирусологических исследованиях.

Цель занятия: ознакомить студентов с требованиями к видам лабораторных животных, их карантинированием, содержанием, кормлением, мечением.

Оборудование и материалы: набор инструментов в стерилизаторе (ножницы, иглы, шприцы, пинцеты, корнцанги), лабораторные животные, ватные спиртовые тампоны краски для мечения, эфир, ксилол, мультимедийное оборудование, плакаты и презентации MS Office Power Point по теме занятия.

Объяснение преподавателя: Большинство вирусов разных таксономических групп могут быть отличимы друг от друга на основе патогенности для лабораторных животных разных видов или возраста.

4.1 Виды лабораторных животных. Наиболее широко в вирусологических лабораториях применяют мышей, бе­лых крыс, кроликов, морских свинок, хомяков, цыплят. У молодых мышей экс­периментально воспроизводят грипп, альфа- и флавивирусные инфекции, ящур (на новорожденных мышатах) и др. Они восприимчивы ко многим вирусам, их легко разводить и с ними удобно работать. Лучше использовать мышей инбредных линий, так как они почти одинаково реагируют на тот или иной вирус. У крыс также создают инбредные линии, но эти животные более устойчивы к оп­ределенным вирусным инфекциям, чем мыши. Онкогенность некоторых виру­сов широко изучают на золотистых хомячках. Для вирусологических опытов обычно используют гладкошерстных морских свинок массой 250–300 г.


Ту или иную инфекцию иногда изучают на животных нескольких видов, об­ладающих разной чувствительностью к данному вирусу, что позволяет диффе­ренцировать вирусы, вызывающие клинически сходные симптомы болезни (на­пример, ящур, везикулярный стоматит, везикулярная экзантема и везикулярная болезнь свиней).

По генетическим качествам лабораторных животных делят на четыре группы:

1) животные смешанного происхождения, полученные от разных животноводов, такие животные гетерогенны;

2) животные, полученные непосредственно из од­ного источника, однако генетически такие животные вариабельны;

3) инбредные линии животных. Их получают в результате спаривания брата с сестрой или родителей с детьми по крайней мере не менее 20 поколений. При таком методе разведения достигается все возрастающая степень гомозиготности.

4) однородные гибриды F 1 . Высокая степень гетерозиготности, характерная для каждого гибрида, связана здесь с генетическим однообразием, которое соответствует степени гомозиготности родительских линий. Как правило, однородные гибриды F 1 менее изменчивы, чем обе родительские ли­нии. Животные-мутанты имеют отдельно выраженный наследственный фактор, который обусловливает видимое отклонение от нормальной формы.

Отрицательная сторона выделения вируса на лабораторных животных – воз­можность диагностических ошибок вследствие активации скрытого вирусоносительства. В этом случае развитие симптомов болезни после введения матери­ала не следствие действия введенного вируса, а результат самой процедуры, на­рушающей предшествующее равновесие в организме. В это время проявляется вирус или другой инфекционный агент, длительно персистирующий в организ­ме. Выражается это резкими неврологическими симптомами (повороты вдоль длинной оси тела).

Наличие скрытой вирусной инфекции может также выражаться уменьшени­ем или исчезновением чувствительности животных к исследуемому вирусу вслед­ствие явления интерференции. Возможен и противоположный эффект, а имен­но – явление синергизма в действии вирусов, что дает иногда результаты, труд­ные для правильной интерпретации.

Для некоторых вирусологических работ, например при выделении вируса с невыясненными болезнетворными свойствами, необходимо использовать гнотобиотов. Термин «гнотобиоты» объединяет две категории животных: безмик­робных (стерильных), не содержащих никаких жизнеспособных микробов, и гнотофор – носителей одного (моногнотофоры), двух (дигнотофоры) или более (полигнотофоры) микроорганизмов. В настоящее время безмикробные животные по динамике роста делятся на три группы: I – обезьяны, поросята, цыплята растут лучше обычных животных или наравне с ними; II – крысы, мыши, собаки, кошки растут наравне с обычными животными; III – морские свинки, кролики, козлята, ягнята растут хуже обычных животных.

Стерильных птиц получают посредством инкубации яиц со стерильной скор­лупой в стерильном инкубаторе, лабораторных животных – путем кесарева се­чения или гистерэктомии. Содержат животных в стерильных изоляторах. Воз­дух, вода и корм должны быть стерильными.

Особое значение среди гнотобиотов занимают СПФ-животные (Specific pathogen free), которые свободны только от патогенных микроорганизмов. В их организме имеются все необходимые для нормальной жизнедеятельности бактерии и ви­русы, которые в совокупности создают группу так называемой резидентной (по­лезной) микрофлоры. В настоящее время получены лабораторные СПФ-живот­ные – крысы, морские свинки, кролики, поросята, птицы и др.

4.2 Цели использования лабораторных животных. В настоящее время лабораторных животных используют в вирусологии для:

– обнаружения вируса в патматериале;

– первичного выделения вируса из патматериала;

– накопления вирусной массы;

– поддержания вируса в лаборатории в активном состоянии;

– титрования вируса;

– получения гипериммунных сывороток;

– в качестве тест-объекта в реакции нейтрализации.

В вирусологии используют кроликов, морских свинок, белых крыс, белых мышей, золотистых хомячков. Однако только некоторые вирусы удается культивировать на животных перечисленных видов. Во многих случаях для тех же целей используют других чувствительных к данному вирусу животных: кур, голубей, котят, щенков и т. д. Так, биопробу при диагностике оспы птиц ставят на курах, оспы овец – на овцах, чумы свиней – на подсвинках.

4.3 Требования к лабораторным животным. Комплектуя группы животных для вирусологических исследований, необходимо выполнять следующие требования:

– животное должно быть чувствительным к данному вирусу;

– возраст его имеет большое значение для культивирования многих вирусов. Большинство вирусов лучше размножается в организме молодых и даже новорожденных животных. Например, для биопробы на бешенство и ящур используют мышей-сосунов, на ларинготрахеит птиц – цыплят. Но в то же время заражение взрослых кроликов вирусом болезни Ауески ведет к появлению ярких и специфичных клинических признаков заболевания;

– стандартная чувствительность достигается подбором животных определенного возраста и одинаковых по массе;

– лабораторные животные должны быть здоровы. Животные, поступающие в виварий вирусологической лаборатории, должны быть привезены из благополучного по инфекционным заболеваниям хозяйства. Их содержат изолированно, т. е. в карантине (белых мышей и крыс 14 дней, а остальных животных 21 день). В этот период за животными ведут ежедневное клиническое наблюдение. При подозрении на наличие инфекционной болезни животных подвергают лабораторному исследованию. В случае установления инфекционного заболевания среди животных всю поступившую партию уничтожают.

4.4 Содержание лабораторных животных. Виварий для лабораторных животных должен иметь основное помещение для животных, моечную (с боксом, сушиль­ными и стерилизационными установками), кухню для приготовления корма с одним по крайней мере столом, оборудованным для приготовления корма, и холодильником для скоропортящихся продуктов, кладовую, операционную, гар­дероб и санитарное помещение для обслуживающего персонала. Помещения должны быть чистыми. Стены и полы легко дезинфицируемыми. Запасы корма следует хранить в специальных помещениях. В местах содержания опытных животных желательно иметь гигрометр и термометр.

Мышей, крыс, хомяков и морских свинок в период опыта рекомендуется содержать в стеклянных банках с крышкой из проволочной сетки или перфори­рованного листового железа. Это облегчает наблюдение за ними, а банки легко чистить и дезинфицировать. Можно содержать животных в металлических клет­ках, которые также легко дезинфицировать.

В качестве подстилки применяют материалы, которые адсорбируют влагу и могут быть использованы животными для постройки гнезда: стружку для мы­шей, крыс, хомяков, морских свинок, хорьков, кур; опилки для крупных мы­шей, крыс, хомяков, хорьков, кур; солому для хомяков, морских свинок, кроли­ков, собак, кур; мякину для мышей, крыс; сено для мышей, крыс, хомяков, хорьков, кур; песок для кур. Следует использовать такую подстилку, которая образует как можно меньше пыли, так как последняя может привести к заболева­нию органов дыхания. Любую подстилку необходимо предварительно стерили­зовать при 100 °С в течение 30 мин.

Помещения для лабораторных животных периодически дезинфицируют, осо­бенно перед размещением новой партии животных. Это относится и к предме­там ухода за животными (лопаты, скребки, метелки и др.), которые соприкаса­ются с навозом и различными отбросами из помещения. После окончания каж­дого опыта клетки обязательно обрабатывают дезинфицирующими растворами, чему должна предшествовать чистка как клеток, так и помещения.

Посуду для корма и воды ежедневно смачивают дезинфицирующим раствором, после чего моют и споласкивают чистой водой. Помещения обрабатывают 1% раствором едкого натра, который используют в течение суток. Дезковрики пропитывают свежим раствором каждые 2 дня. Для дезинфекции предме­тов ухода, мытья полов и посуды рекомендуется использовать 3% раствор хлорамина, который должен быть применен в течение 2 ч. В виварии необходи­мо уничтожать вредителей: мух, комаров, блох, власоедов, клещей, вшей, му­равьев, мышей, крыс.

Лабораторных животных размещают так, чтобы, с одной стороны, было обеспечено функционирование всех систем организма в пределах физиологической нормы, с другой – исключено взаимное перезаражение и распространение инфекции за пределы вивария. Животных содержат в виварии с учетом их физиологической потребности в освещенности и температуре. Так, мышам, крысам нужны полумрак и температура воздуха около 20 °С, морским свинкам, кроликам и курам – дневной свет и температура в пределах 16–23, 14–18 и не ниже 0°С соответственно. Плотность посадки должна составлять примерно 1 г массы лабораторных животных на 1 см 2 дна клетки. Животных обеспечивают регулярным и полноценным кормлением и постоянно питьевой водой.

Если виварий один, зараженных животных содержат изолированно от здоровых и с последних начинают уборку помещения и кормление. Для ухода за зараженными животными используют отдельный инвентарь и кормушки. Лучше иметь два вивария: для содержания здоровых и зараженных животных.

Обслуживающий персонал при работе в виварии пользуется спецодеждой: халатом, резиновыми перчатками, фартуком, непромокаемой обувью. В виварии ежедневно дезинфицируют инвентарь и проводят влажную уборку с применением дезинфицирующих веществ. По окончании эксперимента клетки дезинфицируют, погибших животных обезвреживают сжиганием в печах или автоклавированием.

В группу для проведения опыта подбирают животных с одинаковыми показа­телями массы, температуры, состава крови и т. д. От этого в значительной степени зависит успех выделения, титрования и пассирования вируса. При этом учитывают восприимчивость животных к различным вирусам. Отобранных животных метят, распределяют по банкам или клеткам, отмечают дату постановки опыта, его номер, заражающую или профилактическую дозу препарата и, если необходимо, как мечены животные. Последнее важно, когда в одной банке или клетке находятся животные нескольких групп.

Таблица 1

Масса животных в разном возрасте

Немаловажное значение для токсикологического эксперимента имеют условия содержания подопытных животных. Содержание животных в условиях, вызывающих у них стресс (одиночное со­держание в пенале, грубая фиксация в нефизиологическом положении), приводит к увеличению токсичности. Изменения в пита­нии также сказываются на показателях токсичности.

Для экспериментальных исследований в токсикологических лабораториях используют крыс линии Вистар или белых беспо­родных крыс, которые являются альбиносами черной (Rattus rattus) и серой (пасюк - Rattus norvegicus) крыс, а также белых мы­шей, которые являются альбиносами домовой мыши (Mus musculus). И крысы, и мыши принадлежат к одному и тому же от­ряду грызунов (Rodentia), семейству мышиных (Muridae).

Важное преимущество белых крыс как лабораторных животных заключается в том, что они довольно устойчивы к инфекционным заболеваниям и дают большой приплод.

Белых крыс содержат в помещениях с хорошей вентиляцией, достаточным освещением и равномерной температурой - 20- 22 *С. Лабораторные крысы плохо переносят холод. Влажность воздуха в помещениях не должна превышать 40-45 %.

В качестве подстилки для животных используют крупные опилки, измельченный торф или сечку из соломы или бумаги, тряпки. В клетках поддерживают надлежащую чистоту. Они долж­ны быть всегда сухими, чистыми, хорошо вентилируемыми. Не допускают скопления в них мочи и фекалий.

Кроме ежедневной уборки клетки I -2 раза в месяц тщательно моют и дезинфицируют. Дезинфицировать клетки лучше всего крутым кипятком, горячим 5-10%-м раствором едкой щелочи или такими противомикробными средствами, как хлорная из­весть, креолин, сулема, формалин и др.

Крысы - всеядные животные, поэтому нельзя ограничивать их рацион только растительной пищей. Крысы, не получающие в не­обходимых количествах продукты животного происхождения (мо­локо, мясо, мясокостную муку), минеральные вещества и витами­ны, перестают расти.

Суточная потребность взрослой крысы в кормах составляет в среднем 30-32 г, из них 25 г смешанного корма и 5-7 г овощей.

Кормят крыс обычно 2 раза в сутки. Ввиду того что крысы ночные животные и едят в темное время суток, основную часть корма следует давать вечером, примерно к 20 ч. Не рекомендуется резко менять пищевой режим, к новой пище крыс нужно приучать постепенно. Вода для питья должна быть чистой и свежей, реко­мендуется пользоваться кипяченой водой. Заменять воду молоком также надо постепенно, в противном случае животные отказыва­ются от еды и заболевают.

что мыши более чувствительны к нарушениям температурного ре жима, смене корма и инфекционным заболеваниям (в частности сальмонеллезу). У мышей в гораздо большей степени, чем у крыс проявляется «социальная» иерархия в группе - борьба за лидер­ство, вследствие чего не рекомендуется изменять состав мышей Е клетках.

Суточная потребность взрослой мыши в кормах составляет Е среднем 9,5-10 г смешанного корма и 1-2 г овощей.